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荧光显微镜的使用

(一)载玻片 
    载玻片厚度应在 0.8 ~ 1.2mm 之间,太厚的坡片,一方面光吸收多,另一方面不能使激发光在标本上聚集。载玻片必须光洁,厚度均匀,无明显自发荧光。有时需用石英玻璃载玻片。 

(二)盖玻片 
    盖玻片厚度在 0.17mm 左右,光洁。为了加强激发光,也可用干涉盖玻片,这是一种特制的表面镀有若干层对不同波长的光起不同干涉作用的物质(如氟化镁)的盖玻片,它可以使荧光顺利通过,而反射激发光,这种反射的激发光女可激发标本。 

(三)标本 
    组织切片或其他标本不能太厚,如太厚激发光大部分消耗在标本下部,而物镜直接观察到的上部不充分激发。另外,细胞重迭或杂质掩盖,影响判断。 

(四)封裱剂 
    封裱剂常用甘油,必须无自发荧光,无色透明,荧光的亮度在 pH8.5 ~ 9.5 时较亮,不易很快褪去。所以,常用甘油和 0.5mol/l pH9.0 ~ 9.5 的碳酸盐缓冲液的等量混合液作封裱剂。 

(五)镜油 
    一般暗视野和用油镜观察标本时,必须使用镜油,蕞好使用特制的无荧光镜油,也可用上述甘油代替,液体石蜡也可用,只是折光率较低,对图像质量略有影响。 

荧光显微镜基本操作 
    1 . 关闭房间内的电灯,开启显微镜汞灯; 
    2 . 根据样品标记的荧光素选择相应的滤光片; 
    3 . 放好样品,找到合适的视野; 
    4 . 如需拍照,请确认照相机内已装好彩色胶卷(蕞好使用 27 定胶卷); 
    5 . 开启自拍装置,选择手动档,通常拍摄速度在 0.5---10 秒内; 
    6 . 使用结束,关闭所有电源并做好使用记录。 
    7 . 如需详细说明,请借阅说明书。 

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